Preparação antes da lata
Preparação da suspensão celular: coletar as células pré-cultivadas do agitador ou prato de petri, misturar 1mL para a contagem celular para garantir a densidade da vacinação adequada.
Esterilização do equipamento: verifique se o tanque do reator, a tubulação e os eletrodos foram esterilizados (por exemplo, tratamento de vapor de alta pressão de 121 ° C) para evitar a poluição microbiana.
3, meio de cultura e tampão: preparar uma quantidade suficiente de meio de cultura e pré-ajustar o pH para a faixa alvo (por exemplo, 7.2-7.4), resfriamento de reposição após a esterilização.
Vacinação e cultivo inicial
1, operação estéril: no armário de biossegurança, a suspensão celular é transferida através de um tubo estéril para o reator, ao mesmo tempo que entra na mistura auxiliar de ar comprimido.
2 – Configuração de parâmetros:
Temperatura: As células de mamíferos geralmente são ajustadas a 37°C.
Oxigênio Dissolvido (DO): inicialmente configurado em 40%, mantendo-se estável através de uma mistura de gases (O₂ / N₂ / CO₂).
Controle do pH: Use a bomba periférica para adicionar ácido / álcali ou regular a entrada de CO2 para manter o pH em 6,5-7,0 (ajustado dependendo do tipo de célula).
Monitoramento do processo de cultivo
Amostragem regular: amostragem on-line a cada 24 horas para detectar a densidade celular, pH e concentrações de metabólitos (como glicose, ácido láctico).
2, suplemento de fluxo: de acordo com o consumo de nutrientes, fluxo adiciona um meio de cultura concentrado ou um componente específico (como aminoácidos) para prolongar o período de crescimento do logaritmo celular.
Controle da força de corte: usar agitação de baixa velocidade (por exemplo, 50-100 rpm) ou reator ondulado para evitar danos mecânicos.
IV. Colheita e limpeza
Terminar a cultura: desligar o sistema de controle automático quando a célula entra em fase de decadência ou a acumulação do produto atinge o pico.
2, drenagem e coleta: através do ar comprimido, o líquido de cultura é descarregado no recipiente de resíduos, separando as células do líquido superior.
3, limpeza e esterilização: lavar o tanque e os componentes com água purificada, 0,1 M de hidroxido de sódio mergulhado durante a noite para garantir que não haja resíduos.
V. Atenção
1, operação estéril: todo o processo deve ser rigorosamente evitada a poluição, antes da operação de desinfetar as luvas e ferramentas.
Calibração de parâmetros: verifique regularmente o pH e o eletrodo de oxigênio dissolvido para garantir a precisão dos dados.
Aumentar a produção: a operação em lotes pode ser ampliada diretamente para a escala industrial (por exemplo, 12.000 L), mas a eficiência de mistura e transmissão de massa precisa ser otimizada.
Através das etapas acima, a operação do biorreator de cultura celular pode ser concluída de forma eficiente, aplicável à produção de anticorpos monoclonais, vacinas e outros produtos biológicos.