Preparação antes da operação
1 - Limpeza e desinfecção
Limpeza de desmontagem: depois de desmontar os componentes do reator (tanque, tubulação, eletrodos, etc.), limpe com um líquido de limpeza e uma solução de hidroxido de sódio de 1%, e enxague com água purificada mais de 10 vezes.
Tratamento de desinfecção: os componentes após a lavagem são mergulhados em líquido desinfectante (diluído proporcionalmente) por 30 minutos, evitando o contato direto com a superfície após a secagem.
Manutenção do sensor: o eletrodo de pH é mergulhado em solução saturada de KCl, o eletrodo de oxigênio dissolvido (DO) substitui o eletrólito e elimina as bolhas, polariza por mais de 6 horas.
2 – Montagem de tanques
Montagem vedada: alinhe a tampa do tanque com a base do tanque, aperte uniformemente o parafuso diagonalmente com a ferramenta hexagonal interna para garantir a vedação.
Conexão de tubulação: Conecte a garrafa de suplemento, a garrafa de escape, a garrafa de amostragem, etc., através de tubos de silicone ou junções rápidas, e aperte manualmente o eletrodo após a inserção da interface correspondente.
II. Operação do tanque
1. vacinação celular.
A suspensão celular pré-cultivada é mesclada uniformemente e contada, transferida para a garrafa de vacinação e conectada estérilmente ao tubo de entrada do reator.
Usar ar comprimido para pressionar a suspensão celular no reator para evitar a sedimentação de aglomerações celulares.
2 - Inicialização dos parâmetros
Configurações ambientais: temperatura ajustada em 37 ° C (células de mamíferos), oxigênio dissolvido 40%, pH 7,0 em torno, ajuste automático iniciado pelo painel de controle.
Suplementos e ventilação: a bomba perimótica controla a taxa de hidratação, o sistema de entrada de ar ajusta a pressão do oxigênio para 0,1 MPa para garantir a estabilidade do oxigênio dissolvido.
Controle do processo de cultivo
1 – Monitoramento dinâmico
Conexão de sensores: monitoramento em tempo real de temperatura, pH, DO e outros parâmetros, o controlador ajusta automaticamente a velocidade de agitação (100-300 rpm) e a velocidade de suplementação.
Amostragem on-line: a cada 24 horas, a amostragem detecta a densidade celular e o estado metabólico, e depois da amostragem, a extremidade do tubo é submersa em 75% de álcool para evitar a poluição.
2 – Controle da Poluição
Mantenha o ambiente estéril durante toda a operação e use a chama para desinfetar a conexão para evitar a entrada de impurezas externas.
Operação e manutenção do tanque
1 – Terminar a cultivação.
Desligue o módulo de controle automático, descarte o líquido de cultivo no barril de resíduos com ar comprimido e desconecte o eletrodo.
2 – Limpeza e armazenamento
Desmonte o componente do tanque e banhe com água purificada durante a noite em solução de NaOH 0,1 M para remover completamente os resíduos biológicos.
Depois de secar, o eletrodo é armazenado em um local ventilado e armazenado separadamente em uma caixa de embalagem especial.
V. Observações essenciais
Inspeção de vedação: teste de pressão após a montagem é necessário para evitar vazamentos durante o processo de cultura.
Calibração de parâmetros: o pH e os eletrodos DO devem ser corrigidos antes de cada uso para garantir a precisão dos dados.
Ampliação de escala: siga a proporção constante de volume de ventilação e volume de líquido (VVM) para garantir a eficiência de transmissão de oxigênio dissolvido.
Através das etapas acima, o biorreator de células de aço inoxidável pode alcançar uma cultura celular estável em escala de laboratório até ensaio médio, adequado para processos biológicos de alta precisão como produção de anticorpos e desenvolvimento de vacinas.