Toru NishikawaEquipe publicada em“Jornal da Faculdade Internacional de Odontologia"Pesquisaatravés da cadeia ureazomectina (STZinduzir a construção de um modelo de rato diabético, no qual a peridentite experimental foi induzida para o óxido nítrico (Não(O caminho éFocoInvestigar o mecanismo de deterioração da doença periodontal no estado de diabetes, com foco na análise do fluxo sanguíneo das gengivas, genes relacionados à inflamação (fatores de necrosis tumorais).α/TNF-αSintase de óxido nitrógeno induzida/ iNOSAlterações na expressão e no marcador de nitrostress (nitrotirosina).

Resumo

[Objetivo] Para esclarecer o mecanismo de deterioração da doença periodontal no estado diabético, este estudo foi realizado através da ureazomectina de cadeia (STZinduzir a construção de um modelo de rato diabético, induzir a peridentite experimental nesse modelo e usar o óxido nítrico (Não(O caminho éFocoInicie a exploração.

Materiais e métodos, sim. 5 Masculino de idade semanalSDRatos, por injeção abdominalSTZ（60 mg/kginduzir a diabetes.STZinjeção2 Semanas depois, no segundo molar do lado direito da mandíbula superior (M2Fio de nylon para o pescoço dos dentes (3-0 Surgilonpara induzir a periodontite experimental, o lado como o lado experimental; O outro lado não é tratado como lado de controle. Indução de periodontite experimental2 Semanas depois, o fluxo sanguíneo do tecido da gengiva foi medido e, em seguida, os ratos foram executados, com análises de expressão genética e exames histológicos do tecido da gengiva.

O fluxo sanguíneo das gengivas no lado de controle de ratos diabéticos é significativamente menor do que no lado de controle normal de ratos; Em ratos normais ou diabéticos, o fluxo sanguíneo do tecido gengival aumentou significativamente após a indução da periodontite em relação aos respectivos lados de controle. Análise de expressão genética mostra que em ratos normais, após a indução de peridentiteTNF-αEmbora a expressão genética tenha aumentado, não houve diferença estatística.iNOSaumento significativo da expressão genética; Diabetes em ratos, após a indução de peridentiteTNF-αcomiNOSA expressão genética aumentou significativamente. Os exames histológicos mostraram que a penetração celular inflamatória leve foi observada no local induzido pela periodontite em ratos normais, enquanto que a penetração celular inflamatória significativa foi observada em ratos diabéticos. Uma análise mais aprofundada da expressão de nitrotirosina no tecido da gengiva descobriu que as células nitrotirosina positivas eram visíveis nos locais induzidos pela peridentite em ratos normais, mas que o número de células nitrotirosina positivas aumentou significativamente em ratos diabéticos após a indução da peridentite.

Este estudo confirmou um aumento significativo no número de células nitrotirosina positivas no tecido da gengiva lateral em ratos diabéticos experimentais, sugerindo que o estresse nitro desempenha um papel importante no processo da doença peridental combinada da diabetes; A inibição do estresse nitrogênico pode ser uma das estratégias de tratamento para a periodontite relacionada ao diabetes.

ExperiênciaMateriais e instrumentos

a) Materiais experimentais

1. Animais de Experimento:5 Masculino de idade semanalSDRato

2. Indutores da diabetes: ureazomectina de cadeia (STZ）；Materiais indutores de doenças periodontais: linhas de costura de nylon (3-0 Surgilon）；Anestesia: (pentobarbital）

2) Instrumentos experimentais

1. O Omegawave FLO-N1Fluxômetro Doppler a laserpara medir o fluxo sanguíneo do tecido gengival

O Omegawave FLO-N1Fluxômetro Doppler a laser

Valor do fluxo sanguíneo no tecido da gengiva

2. Quantificação de fluorescência em tempo realPCRInstrumento: Análise Quantitativa da Expressão Genética

3. Microscópio óptico: observação e contagem de células após a coloração de cortes de tecido

4. Equipamento de armazenamento a baixa temperatura: tanques de nitrogênio líquido (para congelamento rápido de tecidos),-80℃Frigorífico (para conservação de tecidos a longo prazo)

5. Almofada de aquecimento: usado para medir o fluxo sanguíneo das gengivas para manter a temperatura retal do rato em37℃

Processo experimental

Criação de animais experimentais e modelos de diabetes

1. TodosSDRatos alimentados em termostato (23±1.0℃(húmedo constante)45±10%Sala de animais, utilização12 Ciclo alternado de luz e escuridão por hora, fornecimento de água da torneira através de um dispositivo automático de abastecimento de água.

2. Injekção abdominal em ratosSTZ（60 mg/kgpara induzir a diabetes;STZinjeção1 Teste o açúcar no sangue do rato após uma semana≥200mg/dLRatos identificados como ratos modelo de diabetes foram incluídos em experimentos de acompanhamento.

2) Indução de periodontite experimental

STZinjeção2 Semana após, para todos os ratos (ratos normais)+ratos diabéticos) para tratamento: em (0,5 mg / kginjeção abdominal) sob anestesia, no segundo molar da mandíbula superior direita (M2Fio de costura de nylon enrolado no pescoço (3-0 SurgilonEvitar danos nas gengivas, fixando-o perto da tampa cardíaca (este lado é o lado experimental); O segundo molar da mandíbula superior esquerda não é tratado (para o lado de controle).

(3) Medição do fluxo sanguíneo do tecido gengival

1. Após a indução da periodontite, por injeção abdominal (0,5 mg / kg(Anestesia de ratos com um fluxômetro Doppler laser)FLO-N1Sonda fixada no lado experimental e no lado de controleM2A gengiva da bochecha está bem acima.

2. Durante a medição, os ratos25℃Aquecimento sobre a almofada para manter a temperatura do recto37℃Valores de fluxo sanguíneo (unidades:ml/min/100g tecido).

4) Organização de recolha e processamento

1. Indução de periodontite experimental 2 Semanas depois, por injeção abdominal (1,5 mg / kgExecutar ratos.

2. Lado experimental de coleta e lado de controleM2O tecido da gengiva lateral da bochecha: uma parte é imediatamente colocada no nitrogênio líquido para congelar rapidamente e, em seguida, transferir para- 80℃conservação no frigorífico (para análise da expressão genética); A outra parte, juntamente com o tecido da mandíbula superior bilateral, é removida e colocada10%Fixação de solução de formalina24 horas (para análise histológica).

Análise da expressão genética

1. usarReagente TRIzolExtração total do tecido da gengiva congeladaRNAMais uma vez, no geralRNAPara o modelo, useRNase H-Transcriptase ReversaSínteseADNc- É.

2. AdopçãoTaqMan Universal PCR Master MixcomO TaqManA sonda, emABI Prisma 7000Realizado no instrumentoPCRreação, as condições de reação são95℃ 1minutos,52℃ 1minutos,72℃ 30segundos, no total.40 Um círculo.

3. aGAPDHPara os genes internos, a adoçãoΔΔCtCálculo legalTNF-αcomiNOSexpressão relativa dos genes.

Conclusões experimentais

Este estudo confirmou um aumento significativo no número de células nitrotirosina positivas no tecido da gengiva lateral em ratos diabéticos experimentais, sugerindo que o estresse nitro desempenha um papel importante no processo de doença peridental combinada com diabetes; A inibição do estresse nitrogênico pode ser uma das estratégias de tratamento para a periodontite relacionada ao diabetes.