Informações sobre colunas específicas
A coluna cromatográfica específica Venusil stachydrine HCL foi projetada para analisar HCL em ervas-mãe benéficas. O produto é baseado em silicone como matriz, fase de ligação devido à adoção de grupos amida neutros, no modo cromatográfico hidrofílico para forte polaridade, compostos orgânicos alcalinos solúveis em água com boa seletividade.
HILIC é um padrão de cromatografia hidrofílica, cuja lavagem é ordenada em ordem de aumento da hidrofílica / polaridade do composto, aumentando a proporção de fase orgânica na fase de fluxo aumenta a retenção de solúvel, a fase de fluxo típica é acetonitril (40% -97%) / água (ou sal tampão volátil), ao mesmo tempo que pode usar uma fase de fluxo ou sal tampão mais volátil, facilitando a combinação com o detector de espectro de massa e o detector de luz de evaporação.
Método de teste e análise do hidroclorático
Refere-se às condições cromatográficas sob a determinação do conteúdo de uma erva materna benéfica da edição de 2015 da Farmacêutica Chinesa:
Utilizando o silicone ligado à propilamida como preenchimento, usando a solução de acetato de gelo de acetitril-0,2% (80:20) como fase de fluxo, o detector de dispersão de luz de evaporação é detectado. O número teórico de placas de torre deve ser calculado em hidrocloreto-sólico não inferior a 6.000.
Coluna cromatográfica: Venusil stachdrine; 5μm，4.6*250mm
Número de pedido: VH952505-LH
Fase de fluxo: nitrilo acetico: 0,2% solução de ácido acetico de gelo = 80: 20 (v / v)
Velocidade de fluxo: 0,5 mL/min
Temperatura da coluna: 20 ℃
Detector: ELSD (Detector de dispersão de luz por evaporação)
Volume de amostra: 10μL
Tempo de retenção / min |
Número teórico de torres |
Fator de atraso |
17.888 |
15203 |
1.06 |
instalação
1, desmantele a caixa de embalagem da coluna para confirmar o tipo e as especificações da coluna cromatográfica.
2, afaste a cabeça de vedação de ambas as extremidades da coluna e coloque a caixa de embalagem em reposição.
3, de acordo com a direção de fluxo indicado no tubo de coluna, conecte a coluna cromatográfica ao instrumento de detecção usando a cabeça PEEK e tubos PEEK ou tubos de aço inoxidável.
Usando um pequeno diâmetro interno de conexão de tubos, a coluna de análise geralmente usa um diâmetro interno de tubos de 0,25 mm (0,010 ") e encurta o comprimento do tubo de conexão, reduzindo assim o volume morto.
Utilização e manutenção
Proteção
Tenha cuidado com a segurança ao conectar e usar as colunas cromatográficas, usando luvas, máscaras e óculos protetores, porque o vazamento de solventes e amostras devido a qualquer causa (conexão de tubulação fraca, envelhecimento da tubulação, envelhecimento da cabeça PEEK) pode afetar a saúde do operador.
Direção de uso
A coluna cromatográfica deve manter a direção da fase de fluxo e a direção da seta marcada pela coluna cromatográfica durante o uso, se não houver circunstâncias especiais, o uso inverso não é recomendado (por exemplo, para limpar os poluentes da cabeça da coluna frontal da coluna cromatográfica, a lavagem inversa de baixa velocidade de fluxo pode ser considerada)
Ativação
Quando a nova coluna específica de ácido clorhidrato de água e álcali é produzida na fábrica, a fase líquida no coluna é acetonitril, e o coluna pode secar temporariamente durante o armazenamento e o transporte.Portanto, a primeira vez que a nova coluna é usada antes de usar mais do que 20 vezes o volume da coluna de acetonitril a uma velocidade de fluxo de 0,5 ml / min para ser ativado e escolher as condições de operação necessárias para o equilíbrio do experimento, se a fase de fluxo necessária para o experimento contém tampão, é necessário usarFaça a transição com a mesma proporção de fluxo de fase orgânica e água para evitar a análise salina.
Tratamento pré-amostra
Para evitar que as impurezas de partículas na amostra ou na fase de fluxo bloqueiem a placa de filtragem frontal da coluna cromatográfica, todos os reagentes e amostras usados no experimento devem ser filtrados com uma membrana de microporosidade de 0,45 μm ou 0,22 μm antes de serem usados. Para amostras com substratos mais complexos, o pré-tratamento é recomendado com o sistema de extração de fase sólida SPE.
Fase de fluxo e pH da amostra
Para que a coluna de cromatografia obtenha uma melhor vida útil e efeitos, siga a faixa de pH recomendada pelo fabricante, a faixa de aplicação da coluna de pH específica de HCL é de 2,0-6,0, o pH muito alto dissolverá o silicone, o pH muito baixo levará a uma queda parcial ou total da fase de ligação, o desempenho da coluna cairá, o que fará com que os resultados experimentais não se reproduzam.
Fase de fluxo e solventes de amostra
O uso de fosfatos ou outros sais tampão insolúveis com os orgânicos em sistemas de fase de fluxo elevada deve ser evitado, evitando danos à coluna cromatográfica devido à análise salina. Para não interferir com o mecanismo de separação HILIC, não use ácido trifluoroacetico e outros reagentes para pares iónicos. Se possível, tente escolher a amostra dissolvida em fase de fluxo e não use água ou DMSO para dissolver a amostra, evitando variações de pico causadas pelo efeito solvente.
Temperatura da pressão da coluna
A temperatura máxima de operação deve estar abaixo de 60 ° C, uso a longo prazo em altas temperaturas (> 60 ° C) danificará a coluna cromatográfica, esta situação é mais evidente quando Ph > 6,0. A coluna cromatográfica pode suportar uma pressão de 400 bar, mas a alta pressão prolongada afeta o desempenho e a vida útil da coluna cromatográfica, e é recomendado que a pressão da coluna seja inferior a 200 bar durante a operação normal.
Colunas de proteção
Na análise de amostras com matrizes mais complexas, para obter uma melhor vida útil da coluna cromatográfica, recomenda-se o uso de colunas de proteção em frente à coluna cromatográfica para bloquear partículas no sistema e retardar a poluição química da amostra em fase fixa.
Procedimento de lavagem
Após o uso da coluna de cromatografia, 50% de acetonitril, 5% de acetonitril e 100% de acetonitril devem ser usados para lavar pelo menos 20 vezes o volume da coluna a 0,5 ml / min, se a coluna tiver uma coluna de proteção de conexão, deve ser lavada separadamente da coluna de cromatografia.
Armazenar
Ao armazenar a coluna cromatográfica, não deixe água ou tampão na coluna cromatográfica, o acetonitril pode ser usado como solvente de armazenamento para a coluna cromatográfica. Colunas cromatográficas não usadas por muito tempo Para evitar que o leito de colunas seco, é recomendado lavar regularmente as colunas cromatográficas, depois de lavar, encher as duas colunas cromatográficas com uma cabeça de obstrução.
