I. Requisitos regulamentares
Os métodos de teste GMP na indústria farmacêutica requerem referência aos métodos de teste ISO, enquanto a regulamentação de controle de poluição microbiana ISO 14698-1 menciona que a monitorização microbiana requer avaliar a eficiência da coleta, e métodos de amostragem e equipamentos de amostragem com alta eficiência podem obter dados mais representativos. Para ambientes com baixa carga biológica, como os ambientes de grau A e B, a amostragem ativa de planctone deve ser mais usada do que o método de amostragem passiva de sedimentação.
Orientações para a avaliação da eficiência da coleta de amostradores microbianos foram apresentadas. A atual versão de 2003 da ISO 14698 divide a eficiência de coleta em eficiência de coleta física e eficiência de coleta biológica, onde a eficiência de coleta física se preocupa mais com se o método de amostragem é capaz de coletar partículas portadoras do ar e a eficiência de coleta biológica se o amostrador ou o método de amostragem pode garantir a sobrevivência das partículas portadoras do ar.
Eficiência da amostragem de bactérias depositadas
O método de amostragem passiva baseado na gravidade geocéntrica é capaz de obter uma eficiência de coleta de partículas ativas de 12 micrômetros em um prato plano de amostragem de 9 cm e uma eficiência de coleta de 0,106 CFU / h em um prato plano de amostragem de 14 cm. Para partículas ativas com tamanho de partícula de 1 micrão que se depositam em um prato plano de amostragem de 9 cm, a eficiência de coleta é de 0,008 CFU / h. Se o limite de grande concentração de Zui de Classe A for de 1 CFU/m3, então um prato plano de 9 cm precisa ser exposto a amostragem de Classe A por 1.250 horas (equivalente a 52 dias) para detectar um dado significativo (uma CFU) em um ambiente de baixa carga de poluição biológica.
Portanto, a bactéria sedimentada "é um método de amostragem muito pouco sensível" e "a bactéria sedimentada reflete melhor o efeito de deposição de partículas portadoras de bactérias, sendo mais sensível apenas quando amostras de placas planas maiores (como 14 cm) ou coleta de placas planas múltiplas". Para o método de amostragem ativa, a coleta de partículas de 1 micrão é 2250 vezes mais eficiente do que a coleta passiva de 9 cm do método de sedimentação. Para amostragem microbiana em ambientes de estratificação de nível A, recomenda-se a utilização de métodos de amostragem mais sensíveis.
Métodos de amostragem de bactérias sedimentares e outros para o ambiente de classe C, D de processos não estériles com cargas relativamente elevadas de micróbios podem ser usados como um complemento à amostragem de micróbios, combinados com métodos de amostragem de planctone. Para ambientes de grau A e B, o método de amostragem de plancton é mais adequado como um método de amostragem mais eficiente.
Riscos no monitoramento diário
Como todos sabem, o projeto do Anexo I para a produção estéril GMP da UE foi lançado em 24 de dezembro de 2017, com mudanças muito importantes:
a) Duplicação das referências a micróbios e associados (23 referências ao apêndice original e 68 referências ao novo esboço)
b) Quase quadruplicou a referência ao risco (o apêndice anterior mencionava isso 20 vezes, o novo esboço 92 vezes).
Assim, é possível entender a importância sem precedentes que as autoridades reguladoras atribuem aos requisitos de microorganismos e riscos. Para a monitorização diária, o novo Apêndice 9.7 menciona que as posições de monitoramento de partículas ativas (microorganismos) na zona A devem ser as que apresentam o maior risco de contaminação por produção estéril, como superfícies estériles, tampões de recipientes abertas, etc. No artigo 9.29, o método de amostragem de partículas ativas (microorganismos) não deve apresentar qualquer risco de contaminação para a produção farmacêutica (Referência 2). Assim, podemos ver a ideia do regulador, que acredita que a monitorização microbiana é importante e que a adoção de métodos de amostragem inadequados pode ter um impacto negativo no ambiente de produção.
É um dilema para a nossa indústria. Anteriormente, muitas empresas não conseguiram encontrar um método microbiano adequado, temendo que a substituição frequente de pratos de amostragem de plancton traria poluição ao ambiente farmacêutico, por isso decidiram não realizar monitoramento ativo de micróbios (plancton). À medida que a indústria farmacêutica moderna se desenvolve, reconhecemos a necessidade de melhorar nossa avaliação e identificação de riscos para métodos de amostragem microbiana.
Os métodos de sedimentação podem causar poluição ambiental, sabemos que a superfície do sedimento tem uma grande quantidade de água nutritiva, entre 10 microns e 20 microns, quando o sedimento é exposto ao ambiente de nível A de produção crítica, essa água nutritiva provavelmente será soprada para a superfície estéril, dentro de recipientes de garrafas de medicamentos, líquidos de medicamentos, causando poluição e poluição cruzada.
A amostragem de plancton devido ao meio de cultura é relativamente fácil de secar, a velocidade de fluxo de amostragem moderna é projetada para amostragem de baixa velocidade de fluxo, pode prolongar o tempo de produção de cobertura de amostragem de plancton, não faça a introdução de substituição de prato plano com frequência. Geralmente levando em consideração o propósito de proteção do fluxo de ar do ambiente de estratificação de nível A, nós também fazemos o projeto de amostragem de plancton de energia equivalente para garantir que o ar acima do amostrador apresenta amostragem de velocidade equivalente e não cause poluição no local.
Os métodos tradicionais de amostragem microbiana colocam todo o amostrador em um ambiente de nível A, enquanto os métodos modernos de controle de processo estéril exigem que qualquer equipamento de material que entra em nível A seja totalmente esterilizado. Os métodos tradicionais colocam o amostrador no nível A, devido ao fato de que os componentes elétricos da placa de circuito no interior do amostrador não podem ser totalmente esterilizados, geralmente a amostragem empresarial VHP ou a esterilização de álcool da superfície do amostrador não pode alcançar o efeito de esterilização completa. Os requisitos de controle de processos estériles da OMS recomendam que as empresas farmacêuticas tomem amostras de métodos de amostragem microbiana divididos, ou seja, separando a cabeça de amostragem do amostrador, colocando a cabeça de amostragem em nível A e podendo ser esterilizada a alta temperatura ou químicamente com antecedência, enquanto o amostrador é colocado em ambiente de fundo de nível B para operar. Desta forma, é possível evitar o impacto da incapacidade do amostrador de esterilizar completamente a área de nível A.
Conclusão
Em resumo, os métodos de amostragem de planctone comprovados são mais eficientes do que os métodos de amostragem de bactérias sedimentares e adequados para ambientes críticos de produção estéril com baixa carga biológica. O método de amostragem de bactérias sedimentares pode ser usado como um método complementar para amostragem de plancton no processo de produção e pode ser usado em ambientes não estériles relativamente pouco críticos e com alta carga biológica, quando usado para evitar o risco de poluição causado por posições inadequadas ou erros operacionais. Independentemente do método utilizado, a localização, a frequência de amostragem, o tempo de cobertura da amostragem e a velocidade de fluxo de amostragem devem ser determinados com base na avaliação de risco do processo de produção.