O princípio básico de funcionamento da cromatografia de fase líquida é a separação baseada nas diferenças nos coeficientes de distribuição de cada componente na amostra entre a fase fixa e a fase de fluxo. Quando a amostra misturada é injetada no sistema de cromatografia de fase líquida, ela entra na coluna de cromatografia com a fase fixa (como silicone, fase de ligação química, polímeros e outros materiais de partículas porosas) com a fase fluente (por exemplo, solventes líquidos como água, metanol, acetonitril). Devido às diferenças nas forças de interação entre os diferentes componentes e a fase fixa (por exemplo, adsorção, distribuição, retenção, afinidade, etc.), o tempo de retenção durante a fase fixa também varia. Especificamente, aqueles componentes com interações mais fracas com a fixação, que se movem mais rápido com a fase de fluxo, irão primeiro fluir excelentes colunas espectrais; Em combinação com a fixação dos componentes, a velocidade de movimento é mais lenta e o fluxo posterior é excelente. Por meio deste processo, os componentes da mistura são separados um por um. Além disso, o efeito de separação não depende apenas da diferença do fator de distribuição do solúvido entre as duas fases (fatores termodinâmicos), mas também de fatores dinâmicos como o fator de difusão, granulosidade fixa, preenchimento de colunas e velocidade de fluxo de fase de fluxo.

Precauções para o uso da cromatografia líquida:

1. Seleção e tratamento de fase de fluxo

Solvente de nível HPLC ou superior deve ser escolhido, a água precisa de água destilada secundária ou água ultrapura, e está disponível para evitar que os micróbios reproduzam o sistema de poluição.

- O sistema de combinação de fluxo deve ser restaurado à temperatura ambiente para evitar que a diferença de temperatura cause instância no desempenho.

- Quando a solução de sal tampão é usada, deve ser filtrada e o fluxo limpo com água pura antes e depois do uso, é proibido deixar a solução de sal tampão no fluxo. Ao mesmo tempo, a coluna cromatográfica deve ser lavada primeiro com uma fase orgânica de baixa proporção (conteúdo de fase orgânica não inferior a 5), e depois conservada com uma fase orgânica de alta proporção para evitar a precipitação de sal tampão. Evite o uso de sal tampão de ácido fosfórico de alta concentração (> 10 mmol / L).

- Tente evitar o uso de acetonitril puro como fase de fluxo para evitar que a polimerização de acetonitril cause a incapacidade de absorver o líquido. Recomenda-se armazenar garrafas marrons quando necessário.

2. Especificações operacionais

- É proibida a desmontagem sob pressão nas conexões de tubulação de alta pressão.

- Ajuste a velocidade de fluxo com cuidado para evitar mudanças drásticas na pressão e temperatura e evitar o enchimento dentro da coluna de impacto.

- As alterações na composição do solvente da solução da amostra de detecção devem ser feitas gradualmente, especialmente na cromatografia de fase inversa, o solvente orgânico não deve ser substituído diretamente por água pura, ou vice-versa.

- A fonte de luz do detector ultravioleta deve ser resfriada por 30 minutos depois de desligar a máquina.

3. Manutenção de segurança

Os resíduos devem ser coletados por categoria e os resíduos orgânicos não devem ser emitidos diretamente.

- Manutenção regular do instrumento, como limpeza da agulha de amostra, substituição da almofada de vedação, etc.