A cromatografia líquida é capaz de lidar com misturas com componentes complexos, grandes diferenças polares ou baixa estabilidade. Ao escolher o gradiente de fase fixa e de fase de fluxo adequado, ele pode alcançar a separação eficaz de alto ponto de ebulição, macromoléculas e substâncias térmicamente instáveis (como proteínas, poliaçúcares, resíduos de pesticidas) sem aquecimento a alta temperatura, evitando o problema da decomposição da substância. A combinação de sistemas de amostragem de alta precisão e detectores de alta sensibilidade (por exemplo, detectores UV, detectores de fluorescência, detectores de espectro de massa, etc.) é capaz de atender às necessidades de detecção de substâncias em traços (concentrações abaixo de níveis de μg / L ou mesmo ng / L). Na análise qualitativa, a composição da substância pode ser identificada com precisão através da dupla validação do tempo de retenção e do espectro de características ou do espectrograma de massa; Na análise quantitativa, o uso de métodos maduros como o método externo e o método interno permite o cálculo preciso da concentração de substância.

A cromatografia de fase líquida usa o líquido como fase de fluxo, devido à maior resistência sofrida pelo fluxo líquido através da coluna cromatográfica, é necessário aplicar alta pressão ao transportador (geralmente até 150 a 35.000 KPa) para garantir que a fase de fluxo possa passar rapidamente pela coluna cromatográfica. Ao mesmo tempo, a velocidade de fluxo da fase de fluxo dentro da coluna também é muito mais rápida do que a cromatografia líquida clássica (geralmente até 1 a 10 mL / min), reduzindo significativamente o tempo de análise. Detectores de alta sensibilidade foram amplamente adotados para melhorar ainda mais a sensibilidade da análise. Por exemplo, os detectores de fluorescência podem ter uma sensibilidade de até 10g e usam pequenas amostras, geralmente apenas alguns microlitros.

Em comparação com a cromatografia a gás, a cromatografia líquida não é limitada pela volatilidade da amostra e é capaz de analisar matérias orgânicas com alto ponto de ebulição, estabilidade térmica pobre e grande peso molecular relativo (maior que 400). Essas substâncias representam quase 75 a 80% do total de matérias orgânicas e, em princípio, podem ser usadas para separação e análise por cromatografia líquida de alta eficiência. Geralmente equipado com sistemas de amostragem automatizados e software de processamento de dados, o processo operacional é mais fácil e rápido, reduzindo o risco de erros manuais.

Etapas de determinação da cromatografia líquida:

1. pré-tratamento da amostra

- Extração: Pese a amostra em cerca de 10 g (com precisão até 0,1 g) em uma garrafa conica de 100 ml, adicione 60 ml de extrato misturado e 2 g de cloreto de sódio e oscile por 30 min. Filtrar através de um orifício de filtragem de 80-120 μm, e os resíduos são lavados com extração misturada de 3 x 10 ml. Combine o filtro e a solução de lavagem em um copo de 250 ml. Aquecer 30 min em água fervente, remover, centrifugar 20 min em 3000r / min, colocar 4 ° C no frigorífico para resfriar 20 min, em seguida, filtrar através do furo de filtragem de 40 ~ 80 μm, coletar o filtro.

- Limpeza: se a composição da amostra for complexa, pode ser purificada por meio de métodos como extração de fase sólida.

- Concentração de condensação: o líquido de extração é concentrado com um soprador de nitrogênio para secar quase, condensado com metanol para o volume apropriado, após a filtragem de microporosidade de 0,22 μm.

2. Preparação do instrumento

- Fase de fluxo: selecione um solvente de nível HPLC ou superior, prepare a fase de fluxo proporcionalmente e filtre com uma membrana de filtro de 0,22 μm para tapar a tampa com o orifício de escape quando usado.

- Instalação da coluna cromatográfica: instale corretamente a coluna cromatográfica no caixa de temperatura da coluna e conecte bem a tubulação para garantir que não haja vazamentos.

Equilíbrio do sistema: lavar o sistema com a fase de fluxo por pelo menos 30 minutos até que a linha de base esteja estável.

3. Análise de amostragem

- Carregamento da amostra: injete a solução da amostra no anel da amostra, prestando atenção para evitar a geração de bolhas.

Recolha de dados: Inicie a estação de trabalho de cromatografia, comece a recolha de dados e registre cromatografia.

4. Tratamento de dados

- Quantificação qualitativa: de acordo com a qualidade do tempo de retenção, a quantificação do método externo ou interno.

Relatório de resultados: Calcular o teor de compostos alvo na amostra e emitir um relatório de teste.