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Resumo do processo operacional das especificações do espectrômetro de fluorescência molecular
Datas:2025-08-21Leia:1
Na área de pesquisa química, biológica, de materiais e medicina, o espectrômetro de fluorescência molecular é usado como uma sonda para revelar as propriedades microluminescentes de uma substância, através da estimulação de amostras para produzir fluorescência, medir seu espectro de emissão, espectro de estimulação, intensidade de fluorescência e parâmetros de vida útil, e é amplamente utilizado na análise de configuração de proteínas, teste de DNA, desenvolvimento de sondas de fluorescência e identificação de poluentes ambientais. A alta sensibilidade do espectrômetro de fluorescência molecular (até o nível de ppb) e seletividade o tornam a escolha para laboratórios modernos. Para garantir a precisão dos dados e a estabilidade dos instrumentos, é necessário seguir processos operacionais científicos e padronizados.
Primeiro passo: Preparação ambiental e pré-aquecimento do instrumento
Certifique-se de que o ambiente de laboratório é limpo, protegido da luz e de temperatura estável (20-25 ° C), evitando fortes vibrações e interferências eletromagnéticas. Ligue a fonte de alimentação do instrumento e, em seguida, ligue a fonte de luz (lâmpada de xenon ou laser), o host e o sistema de refrigeração (se necessário). Pré-aquecer por 30 minutos para manter a saída da fonte de luz estável e a temperatura do detector constante, evitando a deriva da linha de base.
Etapa 2: Preparação e amostragem
Prepare amostras de solução em concentrações apropriadas de acordo com as necessidades do teste para evitar que concentrações excessivas causem "auto-absorção" ou "extinção súbita de fluorescência". Usando um vaso de quartzo limpo (vidro é forte para absorver a luz ultravioleta, não é aplicável), injete o líquido para a altura do vaso 2/3-3/4. Limpe as impressões digitais da parede do prato e as gotas líquidas, alinhe a linha de marcação do prato biserico na direção da luz e coloque a luz no armazém da amostra para evitar arranhar a superfície óptica.
Passo 3: Configuração de parâmetros e seleção de padrões
Configurar o modo de teste através do software de controle:
Espectro de emissão: comprimento de onda de excitação fixo, varredura da faixa de comprimento de onda de emissão;
Espectro de excitação: comprimento de onda de emissão fixo, comprimento de onda de excitação de varredura;
Análise quantitativa: definir um comprimento de onda fixo de excitação / emissão para medir a intensidade da fluorescência.
Defina parâmetros como a largura da fenda (que afeta a resolução e a sensibilidade), o tempo de integração e a velocidade de varredura para equilibrar a relação sinal-ruído com a eficiência do teste.
Passo 4: Correção de fundo e varredura de linha de base
Coloque primeiro o solvente vazio (por exemplo, água deionizada, etanol) no vaso de ceramicidade e execute a "dedução de fundo" ou a "correção de linha de base" para eliminar a dispersão de Raman do solvente e o sinal do fundo do instrumento. Esta etapa é especialmente crítica para amostras de baixa intensidade de fluorescência.
Etapa 5: Medição de amostras e coleta de dados
Substituir a amostra para ser testada e iniciar a digitalização. Observe as curvas espectrais em tempo real para confirmar que não há picos ou ruído anormais. As amostras críticas podem ser digitalizadas repetidamente para verificar a reprodutividade. Para medir a vida útil da fluorescência, é necessário mudar para o modo de contagem de fotões únicos relacionada ao tempo (TCSPC), usando uma fonte de luz de pulso e um detector de alta velocidade.
Passo 6: Salvação de dados e reinicialização do instrumento
Após a conclusão do teste, salve os dados para o caminho especificado e exporte-os para um formato comum (por exemplo, csv, txt). Retire a amostra, lave o prato de biserico com solvente e seque. Desligue a fonte de luz (especialmente a lâmpada de xenon, evitando comutações frequentes), o host e o software. Quando não for usado por muito tempo, cubra a cobertura de poeira.