Utilizar pontosLUNA-FX7 ™ Contador automático de células para otimizar a avaliação de espermatozoides

Palavras-chave: Contador de células automático, avaliação de espermatozoides baseada em imagens, contagem de células, avaliação de sobrevivência, dupla coloração

1 Introdução

A avaliação de espermatozoides (também conhecida como análise de sêmen) desempenha um papel importante no julgamento do potencial fértil masculino. Embora não seja uma medida direta da fertilidade, a fertilidade masculina tem um impacto significativo tanto na fertilidade humana quanto na criação de animais, por isso a avaliação de espermatozoides é uma grande preocupação.

Atualmente, a avaliação de espermatozoides pode ser realizada por meio de citologia de fluxo e ferramentas de análise baseadas em imagens. Compre o LUNA-FX7 ™ Equipamentos automatizados, como contadores automáticos de células, permitem analisar amostras de esperma de forma rápida e fácil com imagens. No entanto, como os espermatozoides são únicos em termos de morfologia e características em comparação com as células de mamíferos, é necessário otimizar os parâmetros analíticos e escolher os corantes adequados.

Este estudo analisou colorantes fluorescentes como SYBR14, AO e PI para otimizar a pontuação de LUNA-FX7. ™ Capacidade de avaliação das células espermatozoides. O objetivo deste estudo é avaliar a eficácia de diferentes combinações de corantes e otimizar a configuração de parâmetros para a avaliação de espermatozoides.

2 Métodos e materiais

2.1 Preparação da amostra

Descongele amostras de sêmen congeladas de vacas e substitua o tampão com PBS. Dependendo da situação da amostra, a amostra de sêmen é diluída em PBS em uma proporção de aproximadamente 1:20 a 1:40.

2.2 Coloração fluorescente

1. mistura:

18 μL de espermatozoides em PBS

2 μL de tintos fluorescentes verdes e vermelhos misturados

Incubar a 37 ° C por 10 minutos

3. Carregue a amostra no suporte de slides adequado

Use o LUNA-FX7 ™ Realizar uma análise

Tabela 1. Ordene por LUNA-FX7 ™ Configuração de parâmetros otimizados para avaliação de espermatozoides no modo avançado

3 Otimizar esquemas de contagem celular e combinações de corantes para avaliações de espermatozoides

ResumoTanto SYBR14/PI quanto AO/PI são adequados para a avaliação da vitalidade dos espermatozoides, mas SYBR14/PI é melhor.

Compre o LUNA-FX7 ™ O protocolo padrão foi otimizado para células de mamíferos comuns, mas a avaliação de espermatozoides requer ajustes em parâmetros como níveis de exposição, tamanho celular e sensibilidade à desunião. Por exemplo, ajustar o tamanho mínimo de pesquisa de 3 µm para 7 µm e ajustar a sensibilidade de desunião de 5 para 7 para melhorar o desempenho da detecção (Tabela 1). Além disso, os níveis de exposição para a coloração SYBR14/PI e AO/PI foram definidos para GF 6 e RF 9, respectivamente.

Com base nisso, realizamos uma análise comparativa dos métodos de coloração SYBR14/PI e AO/PI. Dada a eficácia conhecida da cromatologia SYBR14/PI na avaliação de espermatozoides, estamos preocupados com o desempenho da cromatologia AO/PI. Os resultados sugerem que ambos os métodos de coloração podem ser usados ​​para avaliação de espermatozoides (Figura 1). No entanto, a aplicação do SYBR14 na coloração de espermatozoides é melhor do que a AO, sugerindo que as propriedades químicas do SYBR14 podem ser mais adequadas para essa aplicação.

Imagem fluorescente de espermatozoides tingidos com dois tintores diferentes (SYBR14/PI e AO/PI). A imagem combinada mostra imagens de campo claro, luz verde, luz vermelha e marcação analisadas. As imagens marcadas são imagens de canais fluorescentes compostos, onde o círculo vermelho indica as células mortas e o círculo verde indica as células sobreviventes.

4 Conclusão

Este estudo descobriu que tanto a cromatologia SYBR14/PI quanto a cromatologia AO/PI podem ser usadas para avaliar a sobrevivência de espermatozoides, mas o SYBR14/PI é melhor. Além disso, o ajuste dos níveis de exposição e outros parâmetros é essencial para o desempenho geral da detecção. Pesquise o LUNA-FX7 ™ Não é especificamente otimizado para amostras de espermatozoides, mas com a proporção de diluição da amostra recomendada e otimização das condições de imagem, ele ainda oferece um esquema de avaliação de espermatozoides rápido e conveniente.