Experimento Elisa: Problema da Curva Elisa

Problemas com a curva do ELISA ocorrem na maioria das vezes porque os padrões, operações ou equipamentos não estão no lugar. Conclusão principal: Problemas de calibração geralmente ocorrem no manuseio de produtos padrão, operações de amostragem ou condições de incubação, e o foco nesses pontos pode ser localizado rapidamente.

Causas comuns de má curva padrão

Solução e diluição inadequadas do produto padrão

O pó padrão não é dissolvido adequadamente ou não é misturado quando diluído, resultando em concentrações inadequadas.

Recomendação: Use a diluição especificada de acordo com as instruções, centrifugar brevemente após a dissolução, misturar com uma nova cabeça de pistola quando o gradiente é diluído, soprar ou girar.

Operação de amostragem imprecisa

O pipete não é calibrado, ou a velocidade da amostra, o ângulo não é consistente, e a diferença de volume entre os orifícios é grande.

Recomendação: Calibre o pipete regularmente, vertical e liso durante a amostragem, com a cabeça da pistola na superfície do líquido, mas sem tocar o fundo, para evitar bolhas.

Condições de incubação inconstantes

Sem membrana de vedação ou tampa não rígida, causando efeitos de borda; Tempo de temperatura instável.

Recomendação: Use uma membrana de vedação de alta qualidade, colocar a placa de marcação enzimática na incubadora de temperatura constante para evitar a incubação natural.

Outros problemas e medidas comuns de curva

Baixo no geral

Causas possíveis: o reagente expirou, o produto padrão não foi dissolvido, o líquido terminado não foi imediatamente detectado, o reagente foi misturado.

Recomendação: Mantenha o reagente de acordo com as instruções, centrifuge antes da dissolução do produto padrão, adicione o líquido diluído e misture, detete imediatamente após a terminação do líquido.

Sem sinal

Causas possíveis: Expiração do reagente, contaminação da enzima HRP, erros de operação (por exemplo, ordem errada de amostragem).

Recomendação: Verifique a etiqueta do reagente, distribua o tampão com água destilada fresca e equilibre o reagente à temperatura ambiente por 30 minutos.

Alto em geral

Causas possíveis: gama de densidade óptica do calibrador enzimático muito ampla, alta concentração de líquido de trabalho, longo tempo de incubação / alta temperatura.

Recomendação: a faixa de densidade óptica é definida como 0-3,5, o líquido de trabalho está disponível atualmente e a temperatura da incubadora é controlada por 37 ± 0,5 ° C.

Recomendações de otimização

Tratamento padrão: centrifugar antes de dissolver, adicionar a diluição e misturar.

Operação de amostragem: calibre o pipete para que a amostragem seja verticalmente suave e evite bolhas.

Condições de incubação: selado com uma membrana de placa de vedação, a placa de marcação enzimática é colocada na incubadora de temperatura constante.

Inspeção do equipamento: calibre o pipete regularmente e o calibrador enzimático defina a faixa correta de densidade óptica.

Nota: Este produto é apenas para uso de pesquisa científica, não como dados reais, o experimento deve seguir estritamente as instruções ou consultar um professor técnico.

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