Especificações técnicas do kit de teste de ELISA de 1,5-difosfato-nucleonasacarboxilase vegetal (RuBisCO)

BS-4938 Kit de ELISA vegetal 1,5-difosfato-nucleonasacarboxilase (RuBisCO) 96T/48T

Visão geral do produto

Este kit é usado para a quantificação in vitro da atividade da nucleonasacar-1,5-difosfatocarboxylase/oxidase (RuBisCO) em amostras de tecidos vegetais, células e líquidos relacionados. Esta enzima é a enzima-chave para a circulação de Calvin pela fotossíntese vegetal, cuja atividade afeta diretamente a velocidade da fotossíntese e o processo fotorespiratório. Esta caixa de testes é composta por imunoassorção bicorpal ligada a centrinsas (ELISA), com alta sensibilidade e especificidade.

Princípio de teste

Kit de teste usando o método de centrifugação de dois anticorpos em um passo:

Enzima alvo pré-embalada em amostras capturadas por placas microporosas anti-RuBisCO

Adicionando marcadores HRP para detectar anticorpos para formar um complexo 'anticorpo-antígeno-anticorpo enzimático'

Após a lavagem limpa, adicione o substrato colorido TMB

Após a finalização da reação, o calibrador enzimático determina a absorção (OD) no comprimento de onda de 450 nm

Concentração de RuBisCO na amostra correlacionada positivamente com OD

Composição do Kit

Componente Especificações Condições de armazenamento

Preembalado por placa microporoso 12 x 8 furos 4 ℃

Produto padrão (6 gradientes de concentração) 0.3mL x 6 tubos -20 ℃

Anticorpos enzimáticos 15mL 4 ℃

20 x tampão de lavagem 50mL temperatura ambiente

TMB coloração líquido A / B 15mL cada 4 ℃ de proteção contra a luz

Terminante 15mL Temperatura ambiente

Diluído de amostra 30mL 4 ℃

Tratamento de amostras

amostra de organização

Pese 0,1 g de tecido e adicione 1 ml de extrato líquido para banho de gelo homogêneo

10.000g Centrífuga a 4 ° C por 10 minutos

Retirar o líquido para detecção imediata ou conservar a -80 ° C (para evitar o congelamento repetido)

amostras de células

Coleta de precipitação celular, adicionar extração para fissão

10.000g Centrífuga a 4 ° C por 10 minutos

Detecção de líquido

Amostras de soro/líquido

Temperatura ambiente durante 2 horas ou 4°C durante a noite

Centrífuga de 1.000 g por 20 minutos

Detecção de líquido

Atenção:

Evitar a hemolisis da amostra

NaN3 inibe a atividade da HRP

As amostras frescas são priorizadas e as amostras congeladas evitam derretimento repetido

Passos de operação

Preparar o reagente: equilibrar todos os reagentes até a temperatura ambiente (20-25°C) antes de serem usados.

Por exemplo:

Origem padrão: 50 μL de diferentes concentrações padrão

Furo da amostra: amostra de 50 μL para medição

Buraco em branco: nenhum

Cultivação térmica: 100 μL de anticorpos enzimáticos adicionados a cada poço, reação de proteção contra a luz a 37 ° C por 60 minutos

Lavagem: Adicione 350 μL de líquido de lavagem por poço, deixe-o secar por 1 minuto e repita 5 vezes

Colocação: adicionar 50 μL de substância A e B por orifício, reação de proteção contra a luz a 37 ° C por 15 minutos

Terminação: Adicionar 50 μL de terminação por orifício

Determinação: Determinação de OD de 450 nm em 15 minutos com um calibrador enzimático

Resultado do cálculo

Utilizando a concentração padrão como coordenada horizontal, o valor OD desenha a curva padrão para as coordenadas longitudinais

Determinação da concentração na curva padrão com base no valor de OD da amostra

Concentração da amostra = concentração medida × múltiplo de diluição (se houver)

Indicadores de desempenho

Faixa de teste: 18-650 U/L

Sensibilidade: ≤5 U/L

Coeficiente de variação: <10%

Coeficiente de variação entre lotes: <15%

Precauções

Kit válido por 6 meses, conservação a 2-8 ° C

Reagentes diferentes não podem ser misturados

Proteção contra a luz

A lavagem pode levar a falsos positivos

O líquido de terminação contém substâncias corrosivas e necessita de proteção durante a operação

Todos os resíduos são tratados como perigosos biológicos

Instrumentos necessários

Calificador enzimático (filtro de 450 nm)

Pipeta de precisão (0,5-1000 μL)

37 ° C termostato

Máquina de lavar louça (opcional)

Misturador turbulento

Nota: para uso científico, as informações acima são para referência, não como base experimental, por favor, consulte o professor de tecnologia ou a marca.

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