Especificações técnicas do kit de teste ELISA de lignina microbiana

BS-5184 Kit de ELISA de lignina microbiana

1. Visão geral do produto

Esta caixa de teste utiliza o método de imunoassorção ligado a centrinsas de bicorpos (ELISA) para a detecção quantitativa do teor de lignina em amostras de fermento microbiano, soluções celulares e outros. A lignina é um polímero aromático produzido por micróbios durante o metabolismo ou a degradação da parede celular da planta, e as mudanças no seu conteúdo podem refletir a eficiência do uso da celulose da madeira pelos micróbios.

2. Princípio de teste

Os pacotes de anticorpos de fase sólida são capturados pela lignina na amostra por placas microporosas e, em seguida, são adicionados marcadores enzimáticos para detectar anticorpos para formar o complexo 'anticorpo-antígeno-anticorpo enzimático'. A coloração do substrato TMB foi adicionada após a lavagem, a absorção foi determinada ao comprimento de onda de 450 nm, e o valor de absorção foi positivamente associado à concentração de lignina.

3. Composição do kit

Componente Configuração de 96 buracos Configuração de 48 buracos Condições de armazenamento

Microporose placa de marcação 12 buracos x 8 barras 12 buracos x 4 barras 2-8 ° C vedação seca

Produto padrão (lignin) 0.5mL x 6 tubos 0.5mL x 6 tubos -20 ℃ para evitar a luz

Diluído da amostra 6mL 3mL 2-8 ℃

Anticorpo enzimático-HRP 10mL 5mL 2-8 ℃

20 x tampão de lavagem 25mL 15mL temperatura ambiente

TMB Display Liquid 9mL 4.5mL 2-8 ℃ Proteção contra a luz

Terminante 9mL 4.5mL Temperatura ambiente

Folha de vedação 2 folhas 2 folhas Temperatura ambiente

4. Tratamento de amostras

4.1 Fermentação microbiana

8000 x g centrifugação para remover bactérios em 10 minutos

Remova o líquido para detecção imediata ou congelamento a -80 ℃ (evitar derretimento repetido)

4.2 Liuto celular

12.000 x g centrífuga 15 minutos após ultra-som quebrado

Detecção após 10 vezes diluição com PBS

4.3 Observações

A turbidez da amostra requer filtragem de membrana de 0,22 μm

Evitar o uso de amostras que contenham nitrogênio de sódio (inibindo a atividade da HRP)

5. Passos experimentais

5.1 Preparação do Reagente

Tampon de lavagem: diluição de água destilada 20 vezes a 1 x líquido de trabalho

Gradiente padrão: diluir até 0-60 μg/mL de acordo com as instruções

5.2 Adição

Os microporos correspondentes são adicionados a cada 50μL de produtos padrão / amostra

Incubação a 37°C por 30 minutos

5.3 Lavagem

Adicione 300 μL de líquido de lavagem a cada poço e deixe-o secar por 1 minuto.

Repita 5 vezes.

5.4 Visualização de cores

Incubar 100 μL de anticorpos normalizados por poço a 37 ° C por 30 minutos

Depois da lavagem, adicione TMB coloridor 90 μL, para evitar a luz por 15 minutos

Adicionando líquido de terminação 50μL para terminar a reação

5.5 Determinação

Comprimento de onda de 450 nm para medição do OD (comprimento de onda de referência de 630 nm)

6. Cálculo de resultados

Usando a concentração padrão como coordenada horizontal, o valor OD desenha a curva padrão para as coordenadas longitudinais. A concentração da amostra é calculada por meio de equações de curva, além da faixa deve ser diluída e re-testada.

7. Indicadores de desempenho

Parâmetros Indicadores

Sensibilidade ≤0.5μg/mL

Detecção 1-60μg/mL

Precisão CV dentro do lote <8%, CV entre lotes <12%

Taxa de recuperação 85%-115%

8. Atenção

Equilíbrio de temperatura ambiente 30 minutos antes de usar o kit

Reagentes diferentes não podem ser misturados

Terminar líquido com ácido forte, usar equipamento de proteção durante a operação

Liquido coloridor evita o contato com íons metálicos

Micropipetes devem ser calibrados para evitar contaminação cruzada

9. Período de validade

6 meses (conservação a 2-8°C)

10. Declaração

Este produto é apenas para uso científico.

Nota: Este reagente é apenas para uso científico, não como dados reais, o experimento deve seguir estritamente as instruções ou consultar um professor técnico.

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