Instruções técnicas do kit de teste de ELISA de Interleukina 22 (IL-22)

BS-1649 Kit de ELISA de Interleukina Humana 22 (IL-22)

I. Visão geral do produto

Este kit de teste quantifica as concentrações de interleukina 22 (IL-22) em soro humano, plasma ou soro de cultura celular por meio do método de imunoassorção ligado a centrinsas bicorpais (ELISA). IL-22 é uma citocina secretada por células T ativadas, células NK, etc., que desempenha um papel importante na resposta inflamatória, reparação de tecidos e imunomodulação. Este kit apresenta alta sensibilidade, alta especificidade e boa repetibilidade para experimentos científicos e testes clínicos.

II. Princípio de teste

Anticorpos embalados: anticorpos monoclonais anti-IL-22 humanos são pré-embalados em placas microporosas, ligando-se à IL-22 na amostra para formar um complexo de fase sólida.

Anticorpos marcados por biotina: anticorpos anti-IL-22 marcados por biotina são adicionados e se ligam à IL-22 para formar uma estrutura de clamp.

Compostos enzimáticos: afinina em cadeia que adiciona o marcador de peroxidase de raiz (HRP) para se ligar à especificidade da biotina.

Reação de coloração: adição de coloração de substância (TMB), a cor é proporcional à concentração de IL-22.

Terminação e medição: Adicione a reação de terminação do líquido terminante para medir a absorção fotográfica (OD) a um comprimento de onda de 450 nm e calcule a concentração da amostra por meio de curvas padrão.

III. Composição da caixa

Componente Especificações Quantidade

Placa pré-embalada com microporos 96 buracos / placa 1 peça

Produto padrão (congelado) 2ng/peças 2 peças

Diluído padrão 10mL 1 garrafa

Anticorpos marcados com biotina 6mL 1 garrafa

HRP etiqueta cadeia mofonina 6mL 1 garrafa

Liquido de lavagem (20×) 50mL 1 garrafa

Liquido colorido (TMB) 11mL 1 garrafa

Terminador (2M H₂SO4) 6mL 1 garrafa

Requisitos de amostra

Soro / Plasma: Depois da coleta, deixe em reposição a temperatura ambiente por 30 minutos, centrífuga (2000 x g, 15 minutos) para remover o soro e conservar a -20 ° C ou -80 ° C para evitar o congelamento repetido.

Cultura celular: remoção centrífuga de fragmentos celulares para detecção imediata ou fragmentação para conservação.

Atenção: Evite os conservantes como o nitrogênio de sódio (NaN3) ou EDTA na amostra para não afetar os resultados do teste.

V. Passos operacionais

Dilução padrão: Use a diluição padrão para dissolver o produto padrão para congelamento em 2ng / mL, diluição em proporção de múltiplos (por exemplo, 2ng / mL, 1ng / mL, 0,5ng / mL, 0,25ng / mL, 0,125ng / mL, 0,0625ng / mL), 0ng / mL para o controle em branco.

Amostragem: Adicione 100 μL de padrão ou amostra a cada poço e incube a 37 ° C por 90 minutos.

Lavagem: Elimine o líquido do buraco e lave a placa 3 vezes com líquido de lavagem por 1 minuto cada vez.

Adicionar anticorpos marcados com biotina: adicionar 100 μL por poço e incubar a 37 ° C por 60 minutos.

Combinado enzimático: adicionar 100 μL por poço e incubar a 37 ° C por 30 minutos.

Coloração e terminação: Adicione 90 μL de TMB por orifício, proteção contra a luz durante 15 minutos e adicione 50 μL de terminação.

Determinação: leitura do OD ao comprimento de onda de 450 nm, desenho de curvas padrão e cálculo da concentração da amostra.

6. Resultado do cálculo

Leve a concentração padrão como coordenada horizontal e o valor OD como coordenada longitudinal, desenhe a curva padrão.

Dependendo do valor de OD da amostra, a concentração correspondente na curva padrão é multiplicada pelo múltiplo de diluição (1 se a amostra não for diluída).

Recomenda-se o uso de software especializado, como o ELISA Calc, para cálculos de ajuste de curva e concentração.

Indicadores de desempenho

Sensibilidade: Limite de detecção de 0,015 ng/mL.

Precisão: Coeficiente de variação intra-lote (CV) < 10% e CV entre lotes < 15%.

Intervalo linear: 0,0625-2ng/mL, coeficiente de correlação (R²) > 0,99.

Recuperação de amostras de alta, média e baixa concentração com uma taxa de recuperação entre 85% e 115%.

Especificação: não há reação cruzada com as citocinas IL-10, IL-17 e IL-23.

VIII. Atenção

Conservação do reagente: caixa não aberta de conservação de 2-8 ° C, válida por 12 meses; Os produtos padrão após a abertura, os anticorpos marcados com biotina e os marcadores HRP devem ser congelados em parcelas para evitar a derretida repetida.

Especificações operacionais: Evite a formação de bolhas durante a pipeta e assegure-se de que o líquido no buraco se esgote durante a lavagem.

Proteção de segurança: O líquido de terminação contém ácido forte e use luvas e óculos de proteção durante a operação.

Controle de qualidade: cada lote de experimentos deve ser configurado com dupla inspeção de orifício e detecção repetida quando os valores de OD são anormais.

Análise das Perguntas Frequentes

Problemas Causas possíveis Soluções

Deslinearidade da curva padrão Erro de diluição do produto padrão Re-formulação do produto padrão para garantir diluição multiplicada

O valor de OD da amostra é elevado. A concentração da amostra está fora do limite de detecção. A amostra é rediscoberta após diluição.

Coloração excessiva ou não colorida Inativação de compostos enzimáticos Verifique a validade do reagente e substitua um novo reagente

Liquido residual no furo após a lavagem Lavagem insuficiente ou com força insuficiente Aumentar o número de lavagens, bater fortemente na placa de furo seco

Nota: Este reagente é apenas para uso científico, não como dados reais, o experimento deve seguir estritamente as instruções ou consultar um professor técnico.

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