Instruções técnicas do kit de teste de ELISA para a glutatina peroxidase humana 4 (GPX4)

BS-9843 Kit de ELISA de Glutatínio Peroxidase Humana 4 (GPX4)

Visão geral do produto

Este kit de teste utiliza o método de imunoassorção ligada à centritasa de dois anticorpos em um passo (ELISA) para a quantificação in vitro das concentrações de glutatina peroxidase 4 (GPX4) em soro humano, plasma, homoplasma de tecidos, litos celulares e soro superior de cultura celular. O GPX4 é um membro-chave da família de glutatina peroxidase e desempenha um papel central na inibição da morte de ferro, na manutenção da integridade da membrana celular e no estresse antioxidante, através da eliminação catalítica do peróxido lipídico pela glutatina redutora (GSH).

Princípio de teste

Metodo de centrifugação de anticorpos duplos: o pacote é ligado a anticorpos com GPX4 na amostra, anticorpos marcados com biotina formam um complexo, a peroxidase de raiz (HRP) marcada com a homofilia em cadeia cataliza a reação de coloração, a intensidade de coloração é proporcional à concentração de GPX4 na amostra.

Especificação: o GPX4 pode ser identificado especificamente, sem reações cruzadas com análogos, garantindo a precisão da detecção.

Composição do Kit

Componente Especificações / Descrição

Placa pré-embalada com microporos Placa de 96 poros com anticorpos anti-GPX4 humanos

Padrão Pó congelado, proteína recombinante GPX4 humana, dissolvida em líquido diluído antes da administração

Anticorpos marcados com biotina Liquido, anticorpos anti-humanos marcados com HRP GPX4

Substrato colorante (TMB) líquido, solução de 3,3',5,5'-tetrametilbifenamina

Solução de ácido sulfúrico 2M

Tampon de lavagem 20 x concentrado com Twain-20

Diluído de amostra Tampon para diluir amostras de alta concentração

Membrana de vedação Transparente para vedação de placas microporosas

Processamento e conservação de amostras

Tipo de amostra: soro, plasma, homoplasma de tecido, lysis celular, soro superior de cultura celular, etc.

Tratamento:

Sério/plasma: centrifugar após coagulação a temperatura ambiente (3.000 rpm, 10 min) e retirar o soro.

Homogenização do tecido: prepare uma solução homogênea de 10% com água salina fisiológica e retire-a por centrifugação.

Lição celular: centrifugar após a fissão (15.000 rpm, 10 minutos) e remover.

Condições de conservação: conservação a curto prazo (≤7 dias) 2-8 ° C, a longo prazo (> 7 dias) deve ser congelado a -20 ° C para evitar o congelamento repetido.

Passos de operação

Dilução do produto padrão: diluir o produto padrão para 1000 com a diluição da amostra pg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.63 pg/mL，0 pg/mL para o controle em branco.

Amostragem: Adicione 100 μL de padrão ou amostra por poço e incube a 37 ° C por 90 minutos.

Lavagem: descarte o líquido dentro do buraco, encha cada buraco com o líquido de lavagem, deixe em reposo 30 segundos depois de descartar, repita 5 vezes e seque.

Adicione anticorpos marcados com biotina: Adicione 100 μL de anticorpos marcados com biotina a cada poço e incube a 37 ° C por 60 minutos.

Substrato colorido adicionado: adicionar 90 μL de substrato TMB por orifício e incubar à luz a 37 ° C durante 15-30 minutos.

Terminação da reação: Adicione 50 μL de terminante a cada poço e medir a absorção imediatamente após a mistura.

Resultado do cálculo

Configuração do instrumento: comprimento de onda do enzimático 450 nm (comprimento de onda de referência 630 nm).

Processamento de dados: com a concentração de produto padrão (pg / mL) como coordenadas transversais, valor de OD como coordenadas longitudinais, desenhar a curva padrão. A concentração da amostra é calculada por meio de equações curvas multiplicadas por múltiplos de diluição.

Sensibilidade: 7,69 pg/mL, gama de detecção 15,62-1000 pg/mL.

Precauções

Reação cruzada: não ocorre reação cruzada com análogos como GPX1, GPX2 ou GPX3.

Especificações operacionais:

A lavagem deve ser limpa para evitar que líquidos residuais afetem o resultado.

O tempo de exibição de cores é controlado em 15-30 minutos para evitar que a exibição excessiva cause desvios de dados.

As amostras evitam o congelamento repetido para evitar a degradação das proteínas.

Controle de Qualidade: Recomenda-se que cada lote de experimentos seja configurado com duplo furo e o valor de CV < 10% seja aprovado.

Condições de armazenamento

Caixa não aberta: conservar a 2-8 ° C, com validade de 6 meses.

Após a abertura: produtos padrão, anticorpos, substâncias e outros componentes de acordo com as instruções para evitar o congelamento repetido.

Esta instrução é destinada apenas a fins de pesquisa científica e não se aplica ao diagnóstico clínico. Leia cuidadosamente o manual completo antes de operar e cumpra as especificações de segurança do laboratório.

Nota: As informações acima são para uso científico.

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