Instruções do Kit de Teste ELISA de Daidzein em Rato

BS-8567 Kit de ELISA de Daidzein

Visão geral do produto

Este kit utiliza o método competitivo de imunoassorção enzimática ligada (ELISA) para quantificar o teor de daidzeina em amostras biológicas, como plasma, soro ou homologação de tecidos de ratos. A sojosida é um composto isoflavonoide natural com atividades biológicas antioxidantes, anti-inflamatórias e reguladoras imunológicas, amplamente encontrado em plantas de feijão, e a detecção de seu conteúdo é essencial para a pesquisa farmacológica e avaliação nutricional. Este kit é baseado no princípio de ligação específica antígeno-anticorpo, alcançando uma detecção de alta sensibilidade através da amplificação do sinal marcado por enzimas e é adequado para análises convencionais de laboratório.

Composição do Kit

A placa pré-embalada é microporosa: 96 buracos (12 x 8 buracos), a placa é removível e o pacote é composto por anticorpos específicos da sojosida.

Produto padrão: 6 gradientes de concentração (0,13-61,02 ng / mL), em pó congelado e resolvido com diluição padrão antes da administração.

Marcadores enzimáticos: antígeno competitivo marcado pela peróxidase de raiz moringa (HRP), conservado com proteção contra a luz marrom.

Substrato colorido: solução TMB, líquido transparente incolor.

Terminador: solução de ácido sulfúrico 2M para terminar a reação.

Liquido de lavagem: 20 x tampão concentrado, deve ser diluído com água deionizada.

Dilução da amostra: para ajustar a concentração da amostra para a faixa de detecção.

Folha de vedação: 2 folhas para selagem de placas microporosas.

Instruções: 1.

Condições de armazenamento

Caixa não aberta: conservar a 2-8°C à luz durante 12 meses.

Após a abertura: os produtos padrão, marcadores enzimáticos e substratos coloridos devem ser congelados em partes (-20 ° C) para evitar derretimento repetido; Manter a placa microporosa seca e selada.

É proibido congelar o líquido de lavagem concentrado para evitar a cristalização.

Tratamento de amostras

Amostras de plasma / soro: Centrifugar imediatamente após a coleta (3.000 rpm, 10 minutos), retirar o soro e conservar a -80 ° C. Evitar a hemolítica.

Homogenização do tecido: Pese o tecido, adicione água salina fisiológica (1: 9 w / v) para homogeneizar e extrair o líquido por centrifugação.

Observação: a soyosida na amostra pode estar presente em estado de ligação, recomenda-se a hidrólise da beta-glucosaaldeidase para aumentar a sensibilidade da detecção. As amostras devem ser centrifugadas (5.000 rpm, 10 minutos) ou filtradas (membrana de 0,22 μm).

Passos experimentais

1. Preparação do Reagente

Liquido de lavagem: dilua o concentrado 20 x a 1 x com água desionizada (por exemplo, 10 ml de concentrado + 190 ml de água).

Gradiente padrão: O produto padrão para liofilização é resolvido com diluição padrão, diluindo o gradiente para 0,13, 0,39, 1,17, 3,51, 10,53, 61,02 ng/mL.

Dilução da amostra: dilua a amostra a ser testada até a faixa de detecção com um diluído da amostra (recomenda-se que o múltiplo de diluição seja determinado pré-experimentalmente).

2. Amostragem e incubação

Adicione 100 μL de produto padrão ou amostra a cada poço (apenas diluído da amostra com poço em branco).

Adicione 50 μL de marcador enzimático a cada poço e agite suavemente.

Incubar a 37 ° C durante 60 minutos.

3. Lavagem

Elimine o líquido dentro do buraco, adicione 350 μL de líquido de lavagem a cada buraco, deixe-o em reposição por 30 segundos e seque, repita 5 vezes.

4. Visualização e Terminação

Adicione 100 μL de substrato colorido a cada poço e incube a 37 ° C durante 15 minutos.

Adicione 100 μL de terminante a cada poço e agite suavemente.

5. Determinação

Medir imediatamente a absorção (OD) com um calibrador enzimático a um comprimento de onda de 450 nm, com referência a um comprimento de onda de 630 nm.

Resultado do cálculo

Desenho de curva padrão: com a concentração de produto padrão (ng / mL) como coordenadas transversais, o valor de OD como coordenadas longitudinais, adequado a curva lógica de quatro parâmetros (recomendado o uso de software profissional).

Cálculo da concentração da amostra: substitua a equação da curva padrão de acordo com o valor do OD da amostra e multiplique o múltiplo de diluição para obter a concentração real.

Parâmetros de desempenho

Sensibilidade: limite de detecção 0,13 ng/mL.

Precisão: Coeficiente de variação dentro da placa (CV) < 10%, CV entre placas < 15%.

Taxa de recuperação: 80-120% (método de validação: experimento de recuperação de etiquetas adicionadas).

Intervalo linear: 0,13-61,02 ng/mL com coeficiente de correlação r²≥0,98.

Especificação: taxa de reação cruzada com compostos estruturais semelhantes, como o tintor lignin < 5%.

Precauções

Especificações operacionais: evitar o contato de marcadores enzimáticos e substratos coloridos com íons metálicos; Determine no prazo de 30 minutos após a coloração para evitar a diminuição do sinal.

Controle de qualidade: cada lote de experimentos deve conter curvas padrão e amostras de controle de qualidade (concentrações altas, médias e baixas recomendadas).

Proteção de segurança: o líquido de terminação contém ácido forte, é necessário usar luvas e óculos de proteção para operar.

Tratamento de resíduos: os resíduos que contêm enzimas devem ser descartados após a inativação.

Perguntas frequentes

Sinal baixo: verifique se o tempo de incubação ou a temperatura são insuficientes; Verifique se as etapas de lavagem são adequadas.

Valores de fundo elevados: pode ser devido à falta de lavagem ou à interferência da matriz da amostra, o aumento do número de lavagens ou a otimização do pré-tratamento da amostra é recomendado.

Curvas padrão anormais: os produtos padrão compostos devem ser misturados adequadamente para evitar que as bolhas afetem a precisão da concentração.

NOTA: Este produto é apenas para uso científico e não como base experimental. Por favor, baseie-se nas instruções da caixa de ensaio real.

Kit de teste ELISA de sojasina de rato (Daidzein) Tianjin Bensen tem visto o controle de qualidade como a vida da empresa, buscando o aumento contínuo da competitividade da empresa. A empresa sempre adere às operações: cumprimento da lei, rigor, generosidade, ousar assumir o espírito empresarial como padrão, com a qualidade excessiva e excelente serviço para manter e expandir o mercado, para satisfazer ao máximo as necessidades dos clientes. Ganhar com nossos clientes é nosso objetivo de desenvolvimento. Benson! Parceiros em quem você confia. Estamos dispostos a trabalhar sinceramente com você para criar um futuro melhor. Kit de teste Benson