Instruções do Kit de ELISA de Glutatídina Redutase (GSR) em Rato

BS-3507 Kit de ELISA de Glutatídina Redutase (GSR) de Rato

I. Princípio experimental

Este kit de teste usou o método de imunoassorção ligado a centrinsase de bicorpos (ELISA) para detectar a atividade da glutatina redutase (GSR) em ratos. O pacote de anticorpos anti-GSR do rato foi colocado em uma placa microporosa e, após a adição da amostra a ser testada, o GSR da amostra foi ligado ao pacote por anticorpos. Em seguida, os anticorpos de detecção marcados pela biotina são adicionados para formar um complexo "anticorpo-antígeno-anticorpo marcado por enzimas". Após a adição de amofilina em cadeia (SABC) marcada com peroxidase de raiz de morga (HRP), a absorção (OD) foi determinada a um comprimento de onda de 450 nm através da coloração de substância TMB, com OD positivamente associada à concentração de GSR na amostra.

II. Composição da caixa

Componente Configuração de 48 buracos Configuração de 96 buracos Condições de armazenamento

Placa de marcação enzimática pré-embalada 8 x 6 8 x 12 2-8 ℃

Produto padrão (congelado) 1 peça 1 peça 2-8 ℃

Diluído padrão / amostra 10mL 15mL 2-8 ℃

Anticorpos de detecção de biotina 60 μL (100 x) 120 μL (100 x) -20 ℃

Dilução de anticorpos biotinizados 6mL 12mL 2-8 ℃

SABC Complexo 6mL 12mL 2-8 ℃

TMB Color Display Liquid (A/B) 3mL cada 6mL de proteção contra a luz 2-8 ℃

Liquido final 6mL 12mL 2-8 ℃

20 x líquido de lavagem concentrado 30mL 60mL temperatura ambiente

Folha de vedação 2 comprimidos 4 comprimidos Temperatura ambiente

Instruções 1 cópia 1 cópia -

Tratamento de amostras

Amostras de soro/plasma:

Mantenha a temperatura ambiente total durante 2 horas ou 4 ° C durante a noite, centrífuga 1000g por 20 minutos e retire o líquido.

Evite amostras hemolíticas ou hiperlipídicas, 2-8 ° C pode ser conservado por 48 horas; A conservação a longo prazo é necessária a -20 ° C ou -80 ° C para evitar o congelamento repetido.

amostras de tecidos/células:

Após homologação ou fissão celular, a concentração de proteína é ajustada para a faixa recomendada.

IV. Passos experimentais

Preparação de líquido de lavagem:

Diluir 20 vezes o líquido de lavagem concentrado com água destilada (por exemplo, 1 ml de concentrado + 19 ml de água destilada).

Dilução padrão:

Pegue sete tubos centrífugos, marcando 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64, em branco.

Adicione 200 μL de diluição padrão / amostra a cada tubo e adicione 200 μL de diluição padrão no primeiro tubo e dilua gradualmente após a mistura.

Incubação e incubação:

Adicione 100 μL de padrão ou amostra a cada poço e incube a 37 ° C por 90 minutos.

Elimine o líquido e lave 3 vezes (por 1-2 minutos cada vez).

Reações de anticorpos enzimáticos:

Adicione 100 μL de anticorpos de detecção de biotina a cada poço (diluído em 1: 100) e incube a 37 ° C por 60 minutos.

Lavar três vezes.

Reações do complexo SABC:

Adicione 100 μL de complexo SABC a cada poço e incube a 37 ° C por 30 minutos.

Lavar três vezes.

Colocação e terminação:

Adicione 90 μL de líquido de coloração TMB (mistura equivalente de líquido A / B) a cada poço e incube a 37 ° C durante 15 minutos.

Adicione 50 μL de terminante a cada poço e medir imediatamente após a mistura.

V. Resultado do cálculo

Use a concentração padrão como coordenada horizontal (X) e o valor OD como coordenada longitudinal (Y), desenhe a curva padrão.

Calcule a concentração de GSR com base no valor de OD da amostra substituído pela equação da curva padrão.

VI. Atenção

Conservação do Reagente:

Os produtos padrão e os anticorpos biotinizados precisam ser conservados a -20 ° C para evitar o congelamento repetido; Os outros componentes são mantidos a 2-8 ° C.

Tratamento de amostras:

Evitar o uso de amostras hemolíticas, hiperlipídicas ou turbas; As amostras de tecido devem ser homogeneizadas adequadamente.

Especificações operacionais:

Pipetagem precisa ser precisa para evitar a poluição cruzada; A lavagem é necessária, o líquido residual afeta o resultado.

Calibração do instrumento:

O comprimento de onda do padrão enzimático deve ser calibrado até 450 nm e o buraco em branco ajustado a zero.

Proteção de segurança:

O líquido de terminação contém ácido sulfúrico e use luvas e óculos de proteção durante a operação.

VII. Resultados esperados

Sensibilidade: Detecta GSR de até 0,156ng/mL.

Gama linear: 0,156-10ng / mL.

VIII. Ámbito de aplicação

Este kit é adequado para o teste quantitativo de GSR em soro, plasma, homologação de tecidos e soro de cultura celular de ratos para fins de pesquisa científica.

Dica: Por favor, as instruções específicas do kit de ensaio terão precedência, e as instruções completas devem ser lidas antes do experimento e a integridade dos componentes deve ser confirmada.

Nota: Este reagente é apenas para uso científico, não como dados reais, o experimento deve seguir estritamente as instruções ou consultar um professor técnico.